Investigadores obtuvieron propiedad intelectual por hallazgos sobre la leishmaniasis.
Por: EL TIEMPO
La Oficina de Patentes y Marcas de Estados Unidos acaba de patentar una serie de compuestos identificados por científicos colombianos y que tienen capacidad de inhibir la reproducción de células afectadas por leishmaniasis cutánea. Es una enfermedad infecciosa transmitida por la picadura de un insecto del género lutzomyia, que deposita un parásito en la piel, destruye las células, provoca una úlcera de hasta 15 centímetros y deja un estigma similar al de la lepra en quien la padece.
Las sustancias, que resultaron de la síntesis de sales de amonio, fueron creadas por Luz Amalia Ríos, química de la Universidad de Caldas. Luego, en alianza con el Pecet (Programa de Estudio y Control de Enfermedades Tropicales) de la Universidad de Antioquia, Ríos sometió los compuestos a validación para un posible uso médico.
En esa etapa se comprobó que tres compuestos están en el rango de alta efectividad frente a la enfermedad y uno de ellos no presenta toxicidad contra las células de origen humano.
Con estas sustancias encontradas, investigadores del Pecet se motivaron a crear una crema capaz de inhibir la reproducción de las células afectadas por el parásito que transmite la leishmaniasis, enfermedad que ubica a Colombia como el segundo país con más casos en América Latina, después de Brasil.
La crema, llamada Anfoleish, demuestra mejoría luego de una semana de aplicarse y cicatrización tres semanas después. El hallazgo responde al hecho de que existen pocos medicamentos para este tratamiento y los disponibles derivan del antimonio, elemento que genera toxicidad para un 25 por ciento de los pacientes y en algunos casos produce arritmias e infartos.
Ingenio nacional
La posibilidad de patentar comenzó con un grupo de abogados que, en 2011, exploraron bases de datos de todo el mundo para identificar qué tan novedosa era la posible invención. La conclusión fue que el hallazgo era inédito y podía resultar útil para la sociedad.
Entonces, Sara Robledo, coordinadora de la Unidad de Ensayos Biológicos e Inmunología del Pecet, inició la redacción de un gran volumen de informes para la Oficina de Patentes y Marcas de Estados Unidos (Uspto, por sus siglas en inglés) y para el Tratado de Cooperación en materia de Patentes (PCT), que permite buscar protección para una invención en varios países al mismo tiempo.
En 2012, la patente fue aceptada, pero a esta etapa le siguió un minucioso proceso de revisión internacional que duró dos años y al que le siguieron, en 2014, una serie de descargos y aclaraciones a Estados Unidos sobre la validez y originalidad de los hallazgos. Por fin, los investigadores recibieron respuesta afirmativa y tienen la propiedad intelectual de sus invenciones por 20 años.
Origen: Medicamento colombiano recibe patente de EE. UU. – Medellín – ELTIEMPO.COM
Esta invención se refiere al campo de la bioquímica y de sales de amonio cuaternario que contienen un N- (halometilo) sustituyente como un agente terapéutico contra la leishmaniasis y la enfermedad de Chagas. Leishmaniasis y la enfermedad de Chagas son un grupo de enfermedades causadas por parásitos trypanosomal.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
Hay tres principales manifestaciones clínicas de la leishmaniasis, que se clasifican actualmente como visceral, mucocutánea y cutánea. La forma clínica de la leishmaniasis se determina por la Leishmania especie, ubicación geográfica, y la respuesta inmune del huésped. Las leishmaniasis enfermedades son endémicas en 97 países en 4 continentes, con frecuencia con un tipo de ser más de una amenaza sobre los otros dos en regiones específicas. Se estima que más de 12 millones de personas están afectadas en todo el mundo, con 2 millones de nuevos casos notificados por año (1,5 millones de CL y 0,5 millones VL).
Por otra enfermedad de manos de Chagas, también conocida como tripanosomiasis americana, es una enfermedad potencialmente mortal causada por el parásito protozoario Trypanosoma cruzi (T. cruzi). Se encuentra principalmente en América Latina, donde se transmite principalmente a los humanos por las heces de los triatominos.
Se estima que 10 millones de personas están infectadas en todo el mundo, principalmente en América Latina, donde la enfermedad de Chagas es endémica. Más de 25 millones de personas están en riesgo de la enfermedad. Se estima que en 2008 la enfermedad de Chagas mató a más de 10.000 personas.
El sistema de clasificación divide el género Leishmania en dos sub-géneros: Leishmania (L) sensustricto, presente tanto en el Antiguo y el Nuevo Mundo, y Viannia (V), restringida al Nuevo Mundo. Dentro de estos dos sub-géneros, varios complejos de especies han sido individualizados. Actualmente, al menos veinte especies diferentes se reconocen como infectantes humanos. Las especies más comunes implicados en casos humanos de leishmaniasis son L. (L) donovani, L. (L) infantum, L. (L) mexicana, L. (L) amazonensis, L. (L) tropica, L. (L) mayor, L. (L) aethiopica, L. ( V) braziliensis, L. (V) guyanensis, L. (V) panamensis y L. (V) peruviana. Cada una de estas especies se encuentran en diferentes puntos del mundo y es responsable de causar diferentes tipos de leishmaniasis.
Visceral leishmaniasis es el más patógeno de los tres tipos. Es causada por especies de L. (L) donovani complejo y L. (L) infantum. Los síntomas comunes incluyen fiebre irregular, pérdida de peso, hinchazón del bazo y del hígado y anemia. Si no se trata, visceral leishmaniasis conducirá a la muerte. Endémico L. (L) infantum visceral leishmaniasis afecta principalmente a los niños y L. (L) donovani VL afecta a personas de cualquier grupo de edad que vive en zonas urbanas y rurales. La aparición de este tipo suele ser brusco, pero los síntomas pueden aparecer a partir de 3 semanas a 2 años después de la exposición. Con epidemia visceral leishmaniasis, todos los grupos de edad son igualmente susceptibles. Con este tipo, los hombres también tienen más probabilidades de infectarse que las mujeres en una proporción de 4: 3. En este momento, hay poca comprensión de los mecanismos por los cuales aparente selectividad de hosts y efectos son realizadas.
Mayoría de la investigación para el tratamiento de la leishmaniasis se centra en el desarrollo de mejores quimioterapias porque los medicamentos actuales no son satisfactorios. Antimoniales pentavalentes, como antimoniato de meglumina y estibogluconato de sodio son los fármacos anti-Leishmania más utilizados. Si bien pueden ser terapéutico, tienen efectos secundarios poco satisfactorias como la toxicidad sistémica (cardiaca, renal y hepática), pancreatitis química, la disminución de los glóbulos rojos (Red Blood Cell Count), glóbulos blancos (blanco Blood Cell Count) y el recuento de plaquetas y reversibles neuropatía periférica . Además, estos fármacos requieren un tratamiento prolongado. El tratamiento con antimoniales incluye repetir las inyecciones intramusculares o intravenosos [diario] durante 20-28 días, lo que requiere supervisión médica. Se recomienda que ser inyectado 20 mg / kg de peso corporal al día durante ese período de tiempo. Además de estos inconvenientes, Leishmania parásitos también se están volviendo cada vez más resistentes a estos tratamientos.
La anfotericina B es un tratamiento secundario utilizado para la leishmaniasis, especialmente cuando antimonial tratamiento no ha sido eficaz. Este tratamiento es parenteral en la naturaleza y también altamente tóxico. Se encontró, sin embargo, que una dosis total de 15 mg / kg de peso corporal es 100% eficaz y una dosis de 5-10 mg / kg es 90% eficaz contra la enfermedad visceral indio. Una formulación liposomal reduce la toxicidad, pero a un costo más elevado.
Otros fármacos utilizados actualmente incluyen el alquilo-glicero-fosfocolina, miltefosina, pentamidina y el ketoconazol. La miltefosina es el primer medicamento oral aprobado contra la leishmaniasis. Miltefosina comúnmente induce efectos secundarios gastrointestinales tales como anorexia, náuseas, vómitos (38%) y diarrea (20%). La mayoría de los episodios son breves y se resuelven como se continúa el tratamiento. En ocasiones, los efectos secundarios pueden ser graves y requerir la interrupción del tratamiento. Alergia de la piel, las concentraciones de transaminasas hepáticas elevadas y, en raras ocasiones, se pueden observar insuficiencia renal. Miltefosina debe tomarse después de las comidas, y, si se que se tomen dosis múltiples, se debe dividir. La miltefosina es potencialmente teratogénico y no debe ser utilizado por mujeres embarazadas o las mujeres con potencial fértil para quienes anticonceptivos adecuados no se puede asegurar para la duración del tratamiento y durante 3 meses después.
Ketoconazol tienen una eficacia variable en la leishmaniasis tratamiento. La pentamidina se administra por vía intramuscular o, preferiblemente, mediante infusión intravenosa. Efectos de la diabetes mellitus severa adversa, la hipoglucemia grave, shock, miocarditis y renal toxicidad límite de su uso.
Nuevas drogas como la paromomicina (aminosidina), un antibiótico aminoglucósido, generalmente se administran por vía intramuscular, son objeto de estudio. El 15 mg / kg de sulfato es equivalente a 11 mg / kg de base, y el 20 mg / kg de sulfato es equivalente a 15 mg / kg de base. Dolor leve en el lugar de inyección es el evento adverso más frecuente (55%). Ototoxicidad reversible se produce en 2% de los pacientes. La toxicidad renal es rara. Algunos pacientes pueden desarrollar hepatotoxicidad, indicada por las concentraciones de enzimas hepáticas planteadas; tetania también ha sido reportado.
Compuestos de amonio cuaternario tales como bromuro de amonio octadecyltrimethyl y bromuro de amonio de dodeciltrimetilamonio también se han reportado para inhibir el crecimiento de L. principales promastigotes. El uso de compuestos de amonio cuaternario de alquilo incluyendo ciertos análogos de colina para tratar o prevenir hongos y trypanosomal (por ejemplo, Leishmaniasis), las infecciones también se conoce.
Los compuestos parecen inhibir o perturbar el transporte de colina en los parásitos, lo que inhibe el crecimiento de parásitos. Otras sales de amonio cuaternario que son antibacterianos conocidos, tales como cloruro de metilbencetonio, cloruro de bencetonio, cloruro de cetalconio, cloruro de benzalconio, bromuro de cetrimonio y se han utilizado en combinación con otros fármacos tales como la paromomicina y antimoniato de meglumina; como así como cloruro de bencetonio, en combinación con otras drogas tales como hexadecil-fosforilcolina.
La enfermedad de Chagas puede tratarse con benznidazol o nifurtimox bien. Ambos medicamentos son casi 100% eficaz en la curación de la enfermedad si se administran poco después de la infección en el inicio de la fase aguda. Sin embargo, la eficacia de ambos disminuye cuanto más tiempo una persona ha sido infectada. Benznidazol y nifurtimox no deben tomarse por mujeres embarazadas o las personas con insuficiencia renal o hepática. Nifurtimox también está contraindicado para las personas con un fondo de trastornos neurológicos o psiquiátricos.
Múltiples vías metabólicas y dianas moleculares específicas han sido estudiados en parásitos trypanosomatid. Las vías de la biosíntesis de lípidos de membrana son un objetivo viable para los compuestos anti-trypanosomal desde fosfolípidos tienen un papel importante en la biología celular de la composición lipídica parásito y la membrana difiere significativamente en comparación con los mamíferos.
RESUMEN DE LA INVENCIÓN
La presente invención presenta una serie de sales de N- (halometilo cuaternario) amonio con estructura general [XCH 2 -N + (R) (R ‘) – WG] A -, de la síntesis fácil y a un bajo costo de producción.
Según un aspecto de la invención, in vitro e in vivo demostraron la eficacia de algunos de los compuestos evaluados contra cutánea leishmaniasis y otras enfermedades parasitarias.
De acuerdo con otro aspecto de la invención, los compuestos 3b, 3c, 13a, 13b, 13c, 14a, 14b y 14c se sintetizaron por primera vez según FIG. 4.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS
Otras características y ventajas de la invención serán evidentes a partir de la siguiente descripción detallada tomada conjuntamente con las figuras adjuntas que muestran realizaciones ilustrativas de la invención, en los cuales:
FIG. 1 ilustra la estructura química general de la serie de sales de amonio cuaternario N- (halometilo).
FIG. 2. Describir los compuestos sintetizados y evaluados contra amastigotes axénicos de L. (V) panamensis. Los compuestos 3b, 13b y 14c también se evaluaron in vivo como un tratamiento tópico.
FIG. 3. Mostrar el esquema sintético de cuatro pasos para la producción de las sales de amonio cuaternario N- (halometilo).
FIG. 4. Mostrar los compuestos ensayados in vitro frente a L. tarentolae.
FIG. 5. Mostrar los compuestos evaluados contra las células de macrófagos infectados con L. (V) panamensis.
FIG. 6. Mostrar los compuestos evaluados en el estudio in vivo en el hámster dorado para cutánea leishmaniasis.
FIG. 7. Mostrar la tabla 1, la eficacia in vitro de los compuestos (EC50) contra los amastigotes axénicos de L. (V) panamensis.
FIG. 8. Mostrar la tabla 2, la eficacia in vitro de los compuestos (EC50) contra amastigotes de L. (V) panamensis que han infectado macrófagos.
FIG. 9. Mostrar la reducción de la cutánea leishmaniasis área de la lesión (mm2) de hámsters dorados infectados como una función del tiempo (días) después del tratamiento tópico.
A lo largo de las figuras, los mismos números y caracteres de referencia, a menos que se indique lo contrario, se usan para denotar elementos similares, componentes, partes o características de las realizaciones ilustradas. La presente invención se describirá en detalle en conjunción con las figuras adjuntas, en vista de las realizaciones ilustrativas.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN
FIG. 1ilustra la estructura química general de la serie de sales de amonio cuaternario N- (halometilo) de acuerdo con la invención. Anión A – es un haluro (cloruro, bromuro, yoduro), acetato, p-toluenosulfonato o cualquier otro anión farmacéuticamente aceptable. R y R ‘son grupos alquilo tales como metilo, etilo, propilo o butilo (que son ya sea del mismo grupo o diferentes entre sí). W es una correa de sujeción química, que se caracteriza por una cadena de carbono (CH 2) n constituido por un número n de unidades de metileno de tal manera que n = 1, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14; la estructura de la correa de sujeción química W ya sea normal o una cadena de hidrocarburo ramificado.
W es también una correa de sujeción química constituida por una cadena oxycarbonated con estructura representada por – (CH 2) s [(CH 2) 2 -O-] t (CH 2) u -, hecho de un número de unidades de metileno s tal que s = 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, y un número t de unidades etilenoxi tal que t = 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, y un número de unidades de metileno u tal que u = 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10. Además, W es también una correa de sujeción química constituida por una cadena con la estructura (CH 2) p [-O-Si (CH 3) 2] q -O-CH 2) r – hecho de un número p de unidades de metileno tal que p = 1, 2, 3, 4, y un q número de unidades de dimetilsiloxano tal que q = 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, y un número de unidades de metileno R tal que r = 0, 1, 2, 3 , 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10.
La cola G es un grupo metilo, un grupo hidroxilo, o un sistema alquenilo con grupos V, Y y Z unidos a los carbonos vinílicos. V, Y y Z son o bien el mismo grupo o que son diferentes entre sí cuando G es un sistema de alquenilo. Los sustituyentes V y / o Y y / o Z corresponden a hidrógeno, un grupo fenilo o cualquier grupo aromático o heteroaromático, o cualquier grupo alquilo, alquenilo o alquinilo. El grupo aromático o heteroaromático lleva átomos de hidrógeno o cualquier tipo y número de sustituyentes en cualquier lugar del anillo, con los sustituyentes aromáticos que incluyen hidroxilo, metoxi o cualquier grupo alcoxi, O-acetiloxi o cualquier grupo-O aciloxi, amino, N-acetilamino o cualquier grupo N-acilamino, flúor, cloro, bromo, yodo, α, α, α-trifluorometilo, cualquier sustituyente alquilo, o cualquier otro sustituyente farmacéuticamente aceptable y cualquier patrón de sustitución, con un número total de sustituyentes en el anillo siendo cero, uno, dos, tres, cuatro, cinco o seis. Estos sustituyentes también se pueden conectar químicamente con algunos otros generar patrones anulares adicionales.
De acuerdo a FIG. 1, La proyección reveló que los compuestos inhiben el crecimiento de parásitos, aunque trabajan con diferentes capacidades.
CUATERNARIO N- (halometilo) sales de amonio como agentes terapéuticos, es una serie de compuestos que se caracterizan por una estructura general que consiste en una N- cuaternario (halometilo) cabeza catión de amonio, una cola G, una correa de sujeción química W, y un contraión A -. El contraión A – es cloruro (Cl -), bromuro (Br -), yoduro (I -), acetato (CH 3 COO -), tosilato (p-CH 3 C 6 H 4 SO 3 -), o cualquier otra anión farmacéuticamente aceptable. El cuaternario cabeza N- (halometilo) catión de amonio está constituido por un átomo de nitrógeno que está coordinado a cuatro ligandos con la siguiente descripción específica: (i) un grupo halometilo (CH 2 -X), donde el halógeno X es flúor (F), cloro (Cl), bromo (Br) o yodo (I); (ii) un grupo alquilo R, tal como metilo, etilo, n-propilo o n-butilo; (iii) otro grupo alquilo R ‘, tal como metilo, etilo, n-propilo o n-butilo; (iv) una correa de sujeción W químico que se une a la cabeza de nitrógeno cuaternario a la cola G.
La cola G es un grupo metilo, un grupo hidroxilo, o un sistema alquenilo con grupos V, Y y Z unidos a los carbonos vinílicos. V, Y y Z son o bien el mismo grupo o diferentes entre sí cuando G es un sistema de alquenilo. Los sustituyentes V y / o Y y / o Z corresponden a hidrógeno, un grupo fenilo o cualquier grupo aromático o heteroaromático, o cualquier grupo alquilo, alquenilo o alquinilo. El grupo aromático o heteroaromático lleva átomos de hidrógeno o cualquier tipo y número de sustituyentes en cualquier lugar del anillo, con los sustituyentes aromáticos que incluyen hidroxilo, metoxi o cualquier grupo alcoxi, O-acetiloxi o cualquier grupo-O aciloxi, amino, N-acetilamino o cualquier grupo N-acilamino, flúor, cloro, bromo, yodo, α, α, α-trifluorometilo, cualquier sustituyente alquilo, o cualquier otro sustituyente farmacéuticamente aceptable y cualquier patrón de sustitución, con un número total de sustituyentes en el anillo siendo cero, uno, dos, tres, cuatro, cinco o seis. Estos sustituyentes también se pueden conectar químicamente con algunos otros generar patrones anulares adicionales.
La correa de sujeción química W es una cadena de carbono (CH 2) n constituido por un número n de unidades de metileno de tal manera que n = 1, 2, 3, 4, 5, 9, 10, 11, 12, 13, correa de sujeción 14. Este producto químico W también podría ser una cadena de hidrocarburo ramificada.
CUATERNARIO N- (halometilo) sales de amonio como agentes terapéuticos con una correa de sujeción química W se caracteriza por una cadena con estructura – (CH 2) p [-O-Si (CH 3) 2] q -O- (CH 2) r – hecha de un número p de unidades de metileno tal que p = 1, 2, 3, 4, y una q número de unidades de dimetilsiloxano tal que q = 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 , 10, y un número de unidades de metileno R tal que r = 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10.
Además, la correa de sujeción química W se caracteriza por una cadena oxycarbonated con estructura representada por – (CH 2) s [(CH 2) 2 -O-] t (CH 2) u -, hecho de un número s de unidades de metileno de tal manera que s = 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, y un número t de unidades etilenoxi tal que t = 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 , 8, 9, 10, y un número de unidades de metileno u tal que u = 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10.
CUATERNARIO N- (halometilo) sales de amonio como agentes terapéuticos son eficaces contra tarentolae de Leishmania parásitos, las especies no patógenas que se utilizan para los procesos de selección previa en la etapa de promastigotes.
Algunos de los CUATERNARIO N- (halometil) sales de amonio como agentes terapéuticos son eficaces contra axénico L. (V) panamensis y L. (L) amazonensis parásitos, especies patógenas humanas que causa cutánea y mucocutánea leishmaniasis.
También, algunos de los CUATERNARIO N- (halometilo) sales de amonio como agentes terapéuticos son eficaces contra L. (V) panamensis y L. (L) amazonensis parásitos, en la etapa de amastigote que han infectado células de macrófagos.
CUATERNARIO N- (halometilo) sales de amonio como agentes terapéuticos es una serie de compuestos que inhiben el crecimiento de parásitos, aunque trabajan con diferentes capacidades. Aquellos compuestos con una arilalquenilo terminal o diarylalkenyl (es decir, G = alquenilo sistema con V = H, Y = H, Z = C 6 H 5 o V = H, Y = C 6 H 5, Z = H o V = H, Y = C 6 H 5, Z = C 6 H 5) fueron más eficaces contra los parásitos que aquellos sin este resto. Curiosamente, los compuestos con G ser un resto diarylalkenyl terminal (es decir, V = H, Y = C 6 H 5, Z = C 6 H 5) son los más eficaces.
El uso de CUATERNARIO N- (halometilo) sales de amonio como agentes terapéuticos para un tratamiento tópico de la cutánea leishmaniasis en hámsteres dorados infectados llevó a 100% de curación de la lesión después de tres meses de tratamiento.
La invención se origina en el estudio del efecto de algunas sales de amonio cuaternario N- (halometilo) en la viabilidad in vitro de L. tarentolae parásitos. En consideración de la similitud estructural de este sales y colina, se hipotetizó que sales de amonio cuaternario N- (halometilo) deben tener un efecto sobre el transporte de colina y el papel metabólico en la formación de la membrana del parásito, resultando en consecuencia en una posible activo ingrediente para una composición farmacéutica contra los parásitos trypanosomal. Así, los compuestos que se muestra en laFIG. 4se ensayaron para determinar su eficacia in vitro frente a L. tarentolae parásitos (una especie no patógena) en la etapa promastigote.
La proyección reveló que los compuestos inhiben el crecimiento de parásitos, aunque trabajan con diferentes capacidades. De todos estos compuestos ensayadosFIG. 4los compuestos con un resto terminal de arilalquenilo (compuestos 4, 6-9, 11) o resto diarylalkenyl (compuesto 3) fueron más eficaces contra los parásitos que aquellos sin este resto (compuesto 1). Curiosamente, el compuesto 3, que tiene un resto diarylalkenyl terminal es el más eficaz.
Luego, una serie de compuestos análogos al compuesto 3 (caracterizada por una cola G ser un resto diarylalkenyl) fueron sintetizados con el fin de evaluar su eficacia in vitro frente a L. (V) panamensis, una especie patógena que causa mucocutánea humana leishmaniasis. Otros análogos halogenados de colina también se sintetizaron y se incluyeron en este estudio in vitro de la eficacia en.FIG. 2ilustra los compuestos evaluados por su eficacia in vitro contra amastigotes axénicos de L. (V) panamensis.
Dado que Leishmania parásitos son conocidos por infectar las células de monocitos, en su mayoría macrófagos y neutrófilos, la eficacia in vitro de algunos de los compuestos también se ensayó en L. (V) panamensis en la etapa de amastigote que se han establecido para infectar células de macrófagos.FIG. 5 contiene la lista de compuestos evaluados.
Se decidió entonces llevar a cabo un estudio preliminar en vivo de los animales de acuerdo a las prácticas estándar utilizando el modelo de hámster de oro para cutánea leishmaniasis, utilizando los compuestos con el mejor perfil como agentes terapéuticos contra la leishmaniasis. Para ello, la eficacia in vivo de los compuestos 3b, 13b y 14c se ensayaronFIG. 6.
Resultados
La tabla que se muestra en FIG. 7contiene las CE 50 valores (cantidad molar de compuesto que mata al 50% de los parásitos en la muestra) obtenidos contra amastigotes axénicos de L. (V) panamensis. CUATERNARIO N- (halometilo) sales de amonio como agentes terapéuticos se compararon con la respectiva no halogenado (es decir, N, N, sales de amonio cuaternario de N-trimetil) y con dos compuestos comúnmente utilizados para tratar la leishmaniasis (antimoniato de meglumina y anfotericina B).
Como se muestra en FIG. 7compuesto 14a es el más eficaz de ellos, siendo más eficiente que el compuesto 3a. Las CE 50 valores de antimoniato de meglumina y anfotericina B son 312 ± 18,6 M y 0,041 ± 0,001 M, respectivamente.
Por otro lado, los resultados del estudio de la actividad in vitro de algunos CUATERNARIO N- (halometilo) sales de amonio como agentes terapéuticos muestran en FIG. 5contra las células de macrófagos infectados con Leishmania panamesis se muestran enFIG. 8.
Las CE 50 valores de antimoniato de meglumina y anfotericina B son 6,33 ± 0,86 mg / ml y 0,05 ± 0,001 g / ml respectivamente.
Se decidió entonces llevar a cabo un pequeño estudio in vivo en animales de acuerdo a las prácticas estándar utilizando el modelo de hámster de oro para cutánea leishmaniasis. Para ello se analizaron la eficacia in vivo de los compuestos 3b, 13b y 14c. El tratamiento consistió en la aplicación tópica de un compuesto suspendido en un tampón acuoso (pH neutro) al día durante diez días.
Los resultados se resumen en la FIG. 9(Un – d) y la evidencia de que la aplicación de los compuestos por vía tópica es conductor a la curación de la mayoría de los animales en el estudio, con resultados similares a los encontrados cuando se utiliza antimoniato de meglumina a través de inyección intramuscular. La dosis requerida de los compuestos 3b, 13b, y 14c es menor que el de antimoniato de meglumina.
Algunos estudios adicionales muestran que los compuestos inducen la muerte parásitos a través de un mecanismo apoptótico. La comprensión del mecanismo de la muerte de parásito es de importancia en el futuro desarrollo de compuestos que son mejores contra los parásitos. La colina es una sal de amonio cuaternario que es necesario para la construcción de las membranas celulares. La colina es utilizado por las células para biosintetizar fosfatidil colina, uno de los principales fosfolípidos que constituyen las membranas celulares. Dada la similitud entre los compuestos ensayados y colina (ver Compuesto 12c enFIG. 7, Se planteó la hipótesis de que los compuestos de la invención pueden inhibir la absorción de colina por los parásitos, o que pueden inhibir algunas enzimas que son catalizar la transformación de colina.
Fosfatidil-colina puede ser sintetizado por el parásito siguiendo la ruta de Kennedy tradicional (Zhang y Beverley, 2010), en la que la colina se convierte en fosfatidil colina a través de una secuencia de pasos, cada uno catalizada por una enzima específica. La primera etapa implica la fosforilación de colina con la enzima colina quinasa. Los estudios cinéticos utilizando la quinasa de colina de L. (L) infantum revelan que algunos de los compuestos, 14a compuesto especialmente es capaz de inhibir esta enzima, reduciendo su eficiencia catalítica. Otros estudios revelan que algunos de los compuestos con la Estructura 1, especialmente compuesto 14a, interfiere con la absorción in vitro de colina por promastigotes de L. tarentolae y, también inhibe la producción in vitro de fosfatidil colina por estos parásitos
De acuerdo con una realización de la invención, se propone una aplicación tópica diaria de una composición a base de las sales de amonio cuaternario N- (halometilo) en una solución tampón acuosa (pH neutro).
Las síntesis de algunas sales de N- (halometilo) de amonio cuaternario representante se llevan a cabo de acuerdo con procedimientos estándar, FIG. 3.
Los materiales de partida para esta secuencia de tres pasos son cloruros ω-bromoacyl 1 que se convierten en ω-bromo-α, a-difenil-alfa-alquenos 2 a través de una reacción de Grignard con un exceso de bromuro de fenilmagnesio y el posterior deshidratación de la terciaria resultante ω-bromo-α, a-diphenylcarbinols con ácido p-toluenosulfónico. Entonces, el anión bromuro es desplazado por dimetilamina dando el respectivo amina terciaria 15, que es a su vez hace reaccionar con diyodometano o cloroyodometano dando lugar a la diana N- cuaternario sales (halometilo) amonio 3, 13 o 14.
En una carrera típica, se añaden 2,6 equivalentes de bromuro de fenil magnesio a 1,0 equivalentes de cloruro de 5-bromopentanoyl disuelto en éter dietílico se secó bajo atmósfera inerte a 0 ° C y se agita durante 15 minutos. Después de este tiempo la mezcla se calentó hasta temperatura ambiente, y después se añadió cloruro de amonio lentamente a la mezcla, y se trató de la manera habitual para producir 5-bromo-1,1-difenil-1-pentanol como un sólido blanco. El producto en bruto se somete a reflujo a continuación durante 6 horas con ácido p-toluenosulfónico (relación 60: 1) menores de benceno, y se trató de la manera habitual para dar 5-bromo-1,1-difenil-1-penteno como un aceite amarillo.
A continuación, se añade una solución acuosa (40%) de dimetil amina (25 equivalentes) lentamente a una solución en THF de 1,0 equivalente de 5-bromo-1,1-difenil-1-penteno que se ha obtenido en el paso anterior. La mezcla se agita a continuación a temperatura ambiente durante 24 horas, y se trató de la manera habitual para dar 5- (N, N-dimetil) amino-1,1-difenil-1-penteno como un aceite amarillo.
Finalmente, 1.0 equivalente de la amina resultante se mezcla con 4,0 equivalentes de diyodometano en acetonitrilo. La mezcla se agitó durante 20 horas o hasta que la sal de amonio cuaternario N- (halometilo) precipita en forma de un sólido blanco. El producto se recristalizó en agua caliente.
Aunque la invención se ha descrito junto con realizaciones específicas, es evidente que muchas alternativas y variaciones serán evidentes para los expertos en la técnica a la luz de la descripción anterior. Por consiguiente, la invención pretende abarcar todas las alternativas y variaciones que caen dentro del espíritu y alcance de las reivindicaciones adjuntas.
| Patente citada | Fecha de presentación | Fecha de publicación | Solicitante | Título |
|---|---|---|---|---|
| GB788915A * | Título no disponible |
| Referencia | ||
|---|---|---|
| 1 | * | Ríos y otros, J. Am. Chem. Soc., 1996, 118, 11313 a 11314. |
| Clasificación Internacional | C07C211 / 63, C07F7 / 10, A61K31 / 14 |
| Clasificación Cooperativa | A61K31 / 14, C07C211 / 63, C07F7 / 10 |